血钻,欢迎收看本期《走近细胞》:基因敲除细胞-优德88手机中文版

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主持人:各位朋友咱们好,欢迎咱们收看本期“走近细胞”之“基因敲除细胞”。咱们都知道CRISPR/Cas9基因修改是一种十分抢手十分火的技能。科学家们寄期望于此技能以处理人类无数种难以霸占的疾病。CRISPR/Cas9基因修改技能不只被常用来构建基因敲除小鼠以用于疾病发病机制和药理药效研讨,还可用来制备基因敲除细胞以供体外试验研讨用。比较老练的基因敲除动物模型的制备技能,因为细胞品种较多,并且生长习性差异很大,制备基因敲除细胞模型反而更有难度。

今晚本节目初次给咱们独家批露如何用CRISPR/Cas9技能构建基因敲除细胞模型。别的,咱们还会有请制造基因敲除细胞的科学家言传身教!

接下来,就让咱们先来拜访一下科学家试验室冰箱里的那一管质粒……

CRISPR/Cas9:没错,我便是这管质粒,我是CRISPR/Cas9。人称基因修改小能手,简略是我的奶名,高效是我的外号。人见人爱,花见花开,用我发文乐畅怀。

主持人:CRISPR/Cas9,你能简略的介绍一下自己吗?

CRISPR/Cas9:我的家园是细菌与古细菌国,在那里我是国家的护卫,专职应对病毒和质粒的侵略。我有许多病毒和质粒的档案,每逢这些坏核酸侵略国家,我就拿着通缉令(crRNA/tracrRNA)去扫描,被我辨认到我就将其消灭掉!现在科学家把我改造了放到质粒载体里,然后给我配发一个优化的通缉令,这个通缉令把原有的crRNA/tracrRNA组合在一同变成了sgRNA,辨认作用仍是杠杠滴。

主持人:你是细菌国的好差人,那能说说你详细是怎样作业的吗?

CRISPR/Cas9:别看我姓名这么时尚,其实我是一个刀客,Cas9核酸酶便是我的刀,我每天拿着刀和通缉令去巡查。SgRNA通缉令上有20个碱基的引导序列用来描绘坏核酸的特征。我每次都运用Cas9核酸酶扫描所遇到的核酸序列,我一般先寻觅PAM序列(NGG和NAG),假如PAM前方的20个碱基序列刚好和通缉令上的引导序列共同,嘿嘿,就别怪我刀下无情、一刀两段了!

主持人:有意思,那你是怎样从细菌国护卫成为基因修改能手的呢?

CRISPR/Cas9:我拿着通缉令和剑进入细胞,我做的作业跟在细菌国做的差不多,仅仅方针变成了基因组DNA。

主持人:这样说来,你便是在基因组上砍了一刀,这好像跟基因修改没有关系吧?

主持人把话筒递给细胞:让咱们来采访一下基因敲除细胞,了解一下其时的景象。

细胞:CRISPR/Cas9自身并没有直接改动我的基因组DNA序列,他仅仅在我的基因组DNA上砍了一刀就拂袖而去,形成一个双链缺口(Double Strand Breaks)。我是个完美主义细胞,我又怎能忍受缺口这种不完美的作业,所以我会想方设法把它补好。一般我会用NHEJ(Non-homologous end joining)的方法进行随机修补,至于缺口修正后是多了碱基仍是少了碱基,我就不论啦!只不过我这次修补刚好是形成了非3倍数的碱基改动,产生了“移码骤变”,所以就把那个基因敲除了。

主持人:看来你是个随意的完美主义者,那你知道基因敲入和点骤变是怎样完成的吗?

科学家接过话筒:我来弥补一下,假如在CRISPR/Cas9形成双链缺口的一同,把包含同源DNA片段的特定序列的修正模板(Donor)图纸一同给细胞,细胞也或许会把缺口修正跟图纸得如出一辙,这种修正形式称为HDR(Homology directed repair),这姿态就可以完成基因敲入或许点骤变了!

主持人:看来科学家对做基因修改很有心得呀!请问您基因修改做的这么好,是有什么诀窍吗?

科学家:诀窍便是专心。我在赛业生物作业十余年了,一向专心于动物和细胞的基因修改。尽管基因修改是一项原理听起来很简略的技能,但真实做起来并没有那么简单。我所做的便是日复一日的继续不断的优化计划,优化试验系统,以取得更高的功率,更快的修改速度,更好的服务客户。

主持人:看来科学家仍是蛮有心得的,接下来咱们进入广告时刻,歇息一下吧。

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